CloDiA PCR技術

CloDiA PCR (Clonal Differential Amplifier PCR)包含兩種技術，分別為Unindel PCR及Stuntmer PCR。Unindel PCR，可以擴增廣泛型的點突變、插入和缺失突變；Stuntmer PCR，可以擴增點突變、缺失、並且可以高效擴增插入突變。
在這兩種技術中，PCR擴增均使用與野生型序列互補的封閉修飾引子抑制野生型擴增，使得突變型序列非對稱性擴增，進而獲得突變型為主的PCR產物。透過Sanger sequencing (桑格定序)可以獲得高靈敏度的突變分析結果。

1. Stuntmer引子具有5'→3'方向排列的三個區域：R區域、linker和E區域。R區域的5'端和E區域的3'端附近（圖中灰色區域）有一個共同區域，兩個引子競爭性結合，而不是同時結合。
2. 當 E 區域結合時，野生型和突變型都會發生擴增。
3. 當R區域與突變區結合時，E引子不會結合，野生型不會被擴增。
4. 在突變型的情況下，R引子不與突變區域結合，突變型透過與E引子結合而擴增。

1. Unindel-PCR由正向引子(Forward)、反向引子(Reverse)和封閉引子(Blocker)組成。正向引子結合於突變區域上游的序列。正向引子的5'端和封閉引子的3'端有一個共同區域（圖中灰色區域）。
2. 當封閉引子與野生型突變區域結合時，正向引子不能結合，使得野生型無法擴增。
3. 在突變型的情況下，封閉引子不與突變區域結合，使得突變型擴增。